· polyacrylamidegél kudu ku monomér acrylamide, polimérisasi bahan dimimitian, katalis, jeung katuhu uyah jeung campuran panyangga babarengan.
· akrilamidajeung BIS (N, N '- methylene double acrylamide) nyaéta matriks gél wangun monomér.
· amonium persulfate ngamimitian prosés polimérisasi napel. Ngarumuskeun lem merlukeun 10% solusi amonium persulfate disiapkeun dina cai. Seuseueurna inpormasi nunjukkeun kabutuhan pikeun dianggo aktip. Tapi, solusi 10% tiasa disimpen dina suhu 4 ℃ sababaraha minggu tanpa kaleungitan kagiatan anu signifikan. Jieun nepi ka 10 ml jeung piceun lamun lem gagal pikeun agrégat.
Tip: Persentase tinaakrilamidadina sequencing lem jeung protéin lem teu sarua. Lamun make acrylamide premade: solusi BIS, pastikeun pikeun meunangkeun botol katuhu.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) nyaéta katalis, dina botol coklat, disimpen dina kulkas. Tambahkeun samemeh tuang lem.
· éléktroforésis polyacrylamide dipaké kaca dina éléktroforésis kudu dikumbah saméméh jeung sanggeus unggal waktu. Saatos éléktroforésis, nyeuseuh ku sikat lemes jeung lawon dina cai soapy panas, bilas ku cai sulingan jeung nangtung nepi ka garing.
· Uap jeung lebu bisa ngabalukarkeun jeung polimér kerung. Sateuacan éléktroforésis, ngabersihan piring gelas nganggo pembersih gelas sareng usap ku sikat anu lembut. Ngumbah ku cai sulingan jeung garing tuntas ku ngusap kertas. Bilas ku étanol 70% sateuacan ngusap ku kertas ngabantosan ngabersihan sareng nyepetkeun pengeringan. Tambahkeun conto acrylamide berturut-turut: BIS, cai, larutan panyangga, amonium persulfat, TEMED. Ngocok ogé jeung tuang geuwat.
Teu perlu degass polyacrylamide saméméh polimérisasi. (Acrylamide dipaké pikeun disimpen dina vakum pikeun miceun gelembung sabab oksigén ngahambat polimérisasi.)
Tips sampel titik lem horizontal.
· nempatkeun sapotong kertas hideung dina kotak handap, tukang hideung pikeun nyieun sababaraha liang sampel pikeun nempo leuwih jelas.
· tank lem kaeusi panyangga, ngan leuwih koloid nu.
· lamun tepi boga lampu, hurungkeun lampu, hayu lampu caang koloid. Tarik sampel kana pipette nu.
· ngagunakeun alat pipetting otomatis.
· dina 10-200 mu 1 titik pindah cair bisa dipaké dina kalolobaan titik dina sampel. Pikeun liang sampel leutik pisan (kirang ti 10μ1), sirah pipette panjang dipaké pikeun sequencing lem leuwih merenah.
· pipetting ngan immersed dina sampel, inhaling cairan gerak lalaunan. Sampel tiasa katingali caket sareng gliserin, sareng ngompa gancang tiasa narik gelembung hawa kana sirah pipette.
· sampel sanggeus inhaling sirah pipetting, bakal mindahkeun sirah cairan gently dina ujung pipe atawa kertas wiping nyedot sirah cair luar tina ogé titik-titik. Kade ulah nyedot sampel.
Teundeun sampel kana liang sampel
· alat pipetting pikeun nyimpen hiji tekanan saeutik, sangkan sampel rada mindahkeun overflow sirah cair.
· sirah pipetting diselapkeun kana panyangga, rada luhur batan liang titik, ngajaga tekanan positif. Ujung pipette bisa diasupkeun kana liang leutik.
· lalaunan jeung steadily sampel kaluar. Ujung pipette disimpen di luhur liang sampel titik, sarta sampel bakal tilelep kana liang. Hayu sampel tilelep pikeun ngeusian liang sampel tinimbang nyorong kana.
· sakali serelek panungtungan sampel kalawan sirah cair, cair bakal pindah ka leg kadua, lalaunan ngangkat cair move, pindah kaluar panyangga
Kumaha ngalakukeun sampling lem nangtung?
· liang sampel titik lem nangtung kabentuk antara dua potongan kaca. Dina lem pisan ipis, sirah pipette malah teu bisa diselapkeun antara dua piring kaca. Tingali gliserin! Nempatkeun sirah pipette leuwih liang sampel sarta sampel bakal tilelep kana liang.
· titik sampel saméméh, pastikeun pikeun nempatkeun titik nangtung tina polipropilén acyl gél sampel liang ieu rinsed beresih. Cuci jauh acrylamide unpolymerized jeung cai nu bisa muncul dina handapeun liang sampel. caina bisa nyieun liang sampel nyata leutik. Anggo jarum suntik 25ml atanapi 50ml sareng jarum 18-gauge. Tuang dina panyangga éléktroforésis jeung taliti siram liang sampel.
· bisa jadi hésé ningali liang sampel, tapi di sarua, sésana téh gampang. Upami aya kaleuwihan liang, panyangga sampel tiasa diuji nganggo biru bromofénol.
waktos pos: Mar-31-2023